siRNA 套餐
为了回馈广大客户对本公司的鼎力支持,特推出 RNAi 系列优惠套餐，供广大新老客户选择。
有效性承诺
客户只需下载beplay序列 GeneID 或者 Accession number, 我们免费帮您设计选择合适的位点，
siRNA oligo 细胞转染效率达到 70%以上，我们可以保证至少有一对可以有效的抑制相应beplay
（mRNA)的表达,抑制效率可达 70％以上.
产品描述
目录号 |
产品名称 |
规格 |
纯化方式 |
交货期限 |
|
A10001 |
普通 siRNA 经济型套餐-A |
1 |
套 |
HPLC |
6 个工作日 |
A10002 |
普通 siRNA 实惠型套餐-B |
1 |
套 |
HPLC |
6 个工作日 |
A10003 |
化学修饰 siRNA 经济型套餐-C |
1 |
套 |
HPLC |
6 个工作日 |
A10004 |
化学修饰 siRNA 实惠型套餐-D |
1 |
套 |
HPLC |
6 个工作日 |
A10005 |
荧光修饰 siRNA 经济型套餐-E |
1 |
套 |
HPLC |
6 个工作日 |
A10006 |
荧光修饰 siRNA 实惠型套餐-F |
1 |
套 |
HPLC |
6 个工作日 |
普通 siRNA 经济型套餐 A
套餐内容 |
规格 |
纯化方式 |
目的beplay siRNA oligos |
3 对（3×2 OD） |
HPLC |
阴性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
FAM 标记阴性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
阳性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
普通 siRNA 实惠套餐 B
套餐内容 |
规格 |
纯化方式 |
目的beplay siRNA oligos |
4 对（4×4 OD） |
HPLC |
阴性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
FAM 标记阴性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
阳性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
化学修饰 siRNA 经济套餐 C
套餐内容 |
规格 |
纯化方式 |
目的beplay siRNA oligos |
3 对（3×2 OD） |
HPLC |
阴性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
FAM 标记阴性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
阳性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
化学修饰 siRNA 实惠套餐 D
套餐内容 |
规格 |
纯化方式 |
目的beplay siRNA oligos |
4 对（4×4 OD） |
HPLC |
阴性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
FAM 标记阴性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
阳性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
荧光修饰 siRNA 经济套餐 E
套餐内容 |
规格 |
纯化方式 |
目的beplay siRNA oligos |
3 对（3×2 OD） |
HPLC |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
|
FAM 标记阴性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
阳性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
荧光修饰 siRNA 实惠套餐 F
套餐内容 |
规格 |
纯化方式 |
目的beplay siRNA oligos |
4 对（4×4 OD） |
HPLC |
阴性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
FAM 标记阴性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
阳性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
in vivo 化学修饰 siRNA 经济套餐 G（全链甲氧修饰，末端胆固醇修饰）
套餐内容 |
规格 |
纯化方式 |
目的beplay siRNA oligos |
3 对（3×2 OD） |
HPLC |
阴性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
FAM 标记阴性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
阳性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
in vivo 化学修饰 siRNA 实惠套餐 H（全链甲氧修饰，末端胆固醇修饰）
套餐内容 |
规格 |
纯化方式 |
目的beplay siRNA oligos |
4 对（4×4 OD） |
HPLC |
阴性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
FAM 标记阴性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
阳性对照 siRNA oligos |
1 对（1×1 OD） |
HPLC |
实验数据
siRNA Real-Time PCR 结果分析
对于 RNAi 实验而言，我们通常需要知道的是某一特定细胞在导入 siRNA 前后某一特定beplay的
表达变化情况来判断 siRNA 起到了 Gene Knockdown 作用。应用荧光定量 PCR 的方法，可以
通过两种途径来实现上述判断，一是测定特定细胞在导入 siRNA 前后某一特定beplay mRNA 数量
的变化，即为绝对定量；二是通过检测特定beplay与某一管家beplay在在导入 siRNA 前后相对表达情况的变化，即为相对定量。通常采用相对定量的方法来检测 siRNA 的 Gene Knockdown 作用。
1．Real-Time PCR 实验设计
Real-Time PCR 实验设计时应包括实验组（导入 siRNA），阴性对照（Negative Control）和 Mock Transfaction 三组。每组至少三个重复。各组同时检测目标beplay和管家beplay的 Ct 值。下例中以 GAPDH 为管家beplay。
2．Real-Time PCR 得到 siRNA 导入前后目标beplay和管家beplay的 Ct 值
各组重复实验的 Ct 值差异不能过大；一般地，重复实验 Ct 值差异在 1 以内是可以接受的。
|
阴性对照（NC） |
Mock Transfection |
|||
Target Gene |
GAPDH |
Target Gene |
GAPDH |
Target Gene |
GAPDH |
30.40 |
23.63 |
24.21 |
22.66 |
26.21 |
24.60 |
30.35 |
23.40 |
24.60 |
22.56 |
26.15 |
24.31 |
30.41 |
23.52 |
24.66 |
22.48 |
26.35 |
24.72 |
3．Real-Time PCR 数据分析
管家beplay)实验组－( Ct 目的beplay- Ct 管家beplay)对照
|
Target Gene |
GAPDH |
Ct |
Ct |
Target Gene |
|
|
|
Target |
Ct– C |
|
|
Average Ct |
Average Ct |
Gene–GAPD |
|
Rel. to Mock |
|
|
|
|
t, Mock |
|
|
|
|
H |
|
|
|
|
|
|
|
|
Moc |
26.24±0.1 |
24.54±0.2 |
1.7±0.21 |
0.00±0.2 |
1.0(1.16－0.86) |
k |
0 |
1 |
|
1 |
|
|
|
|
|
|
|
实 |
30.39±0.0 |
23.51±0.1 |
6.88±0.17 |
5.18±0.1 |
|
验 |
|
|
|
|
|
|
9*1 |
5*2 |
*3 |
7 |
031) |
组 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
NC |
24.49±0.2 |
22.56±0.0 |
1.93±0.25 |
0.23±0.2 |
0.85(0.71－ |
|
4 |
9 |
|
5 |
1.01) |
使用方法
A．siRNA 转染的方法
哺乳动物转染的常见方法有：磷酸钙共沉淀、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和 polybrene、机械法（例如,显微注射和beplay枪）、阳离子脂质体体育，其中阳离子脂质体体育转染法是目前最常用的转染方法。
应用脂质体型转染体育进行转染需要注重的几个方面：转染体育的用量、siRNA 的用量、转染时的细胞密度、转染时的操作顺序、细胞与转染体育/siRNA 复合物的温浴的时间
B．Lipofectamin2000 转染体育
选择最适合的转染体育和转染条件，往往取决于不同的哺乳动物细胞类型和不同的核酸分子。
Lipofectamin2000 适用于核酸的体内和体外操作，可应用于 DNA、RNA、反义寡核苷酸、siRNA
的转染，也可应
用于 DNA/siRNA 的共转染操作；是一种新型的高效 siRNA 转染体育。
Lipofectamin2000 的应用领域：
1、原代培养细胞和转化细胞株的beplay转染
2、siRNA 高通量转染试验
3、DNA 转染；DNA 和 siRNA 的共转染
4、核酸（siRNA、DNA、RNA）的体内导入试验
5、贴壁细胞和悬浮细胞转染
Lipofectamin2000 的特点：
1、不必更换培养基，操作简便易行，可在半小时内完成操作
2、在含血清培养基中也能表现高转染效率
3、细胞毒性低；适用细胞广泛
4、即用型体育，可在含有抗生素的完全培养基中转染
5、基于脂质的转染体育，确保没有 RNAse 活性
6、可介导 siRNA 高转染细胞及体内 siRNA 的高效导入
C. Lipofectamin2000 适用的细胞类型
Lipofectamin2000 转染体育可广泛应用于多种细胞系的 DNA 和 siRNA 转染如：HeLa(人颈部癌细胞)、MCF-7(人乳房癌细胞)、Hep3B(人肝细胞癌细胞)、COS-7(猴肾细胞)、Neuro-2a(鼠神经母细胞瘤细胞)、NIKS(人角质化细胞)、B16(鼠黑素瘤细胞)、DLD-1(人结肠癌细胞)、NIH/3T3(鼠胚胎成纤维细胞)、HT-29(人结肠客户端细胞)、A549(人肺癌细胞)、CHO-k1(仓鼠卵巢细胞)和293(腺病毒 5 DNA 转化的人胚胎肾细胞),SVRbag4 细胞等。
D．转染前细胞培养
在细胞板上培养细胞时，应使细胞汇合在 24 小时内达到 70-90%。
E．合适的 lipofectamin2000 用量
合适的 siRNA(DNA)：lipofetamin2000 比例对核酸的高效转染有重要影响；我们推荐的 DNA：
lipofetamin2000 为 1：0.5—1：5（ug:ul），siRNA：lipofectamin2000 为 1：0.01-1：0.1（pmol：
ul）一般情况下，此范围内都可获得高的转染效率。
F．贴壁细胞转染程序
选用生理状态良好的细胞对提高转染效率很重要。siRNA(DNA)和 lipofectamin 的用量和两者的比例可在推荐范围内适当调整。
1、转染前一天，4-5´104 细胞接种在 24 孔板上，0.5mL 含 FBS 和抗生素的 DMEM（或 Opti-MEM，
其他培养基）细胞培养基。
2、选择用于初期接种的细胞数量，应能在 24 小时内使细胞汇合达到 70-90%。
3、在 50μl 的 DMEM（或 Opti-MEM，或其他无血清培养基）无血清培养基加入 20pmol siRNA(或
0.8μg DNA)，柔和混匀；
4、混匀 lipofectamin 体育，用 50μl 无血清的 DMEM 或 Opti-MEM，或其他无血清培养基）稀
分钟；
5、将稀释好的 siRNA 和 RNAi-Mate 体育混合；轻柔混匀，室温放置 20 分钟,以便形成
siRNA/lipofectamin（或 DNA/lipofectamin）复合物。
6、将 100μl siRNA/lipofectamin（或 DNA/lipofectamin）复合物加到含有细胞和培养基的培养板
的孔中，来回轻柔摇晃细胞培养板板。
7、 细胞在 CO2 培养箱中 37℃温育 24h-48h 后，进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感，孵育 4-6 小时后，除去复合物，更换培养基。
G．悬浮细胞转染程序
1、转染的当天，收集细胞离心，用含 FBS 的培养基重悬。
2、在 50μl 的 DMEM（或 Opti-MEM，或其他无血清培养基）无血清的培养基加入 20pmol siRNA(或
0.8μg DNA)，柔和混匀；
3、混匀 lipofectamin 体育，用 50μl 无血清的 DMEM 或 Opti-MEM，或其他无血清培养基）稀
分钟；
4、将稀释好的 siRNA 和 lipofectamin 体育混合；轻柔混匀，室温放置 20 分钟,以便形成
siRNA/lipofectamin（或 DNA/lipofectamin）复合物。
5、再加入 400μL 细胞悬浮液（细胞数量决定于细胞类型和转染后分析测试的时间）。
6、细胞在 CO2 培养箱中 37℃温育 24h-48h 后，进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感，孵育 4-6 小时后，除去复合物，更换培养基。
H．DNA 和 siRNA 共转染细胞
1、在转染的前一天，4-5´104 细胞接种在 24 孔板上，0.5 mL 含 FBS 和抗生素的细胞培养基。
2、选择用于初期接种的细胞密度，应能在 24 小时内使细胞汇合达到 70-90%。
3、在 100μL 的无血清的培养基中稀释 20pmol siRNA 和 0.2μg DNA，加入 2μl lipofectamin 体育，充分混合，放置 20 分钟,以便形成 siRNA/ DNA/lipofectamin 复合物。
4、将 siRNA/ DNA/lipofectamin 复合物加入培养基中，轻轻混匀。
5、细胞在 37℃温育 24h-48h 后，进行转染后的其它步骤。
I．siRNA 体内导入方法
1、适量的 siRNA 或 DNA 溶于不含 RNA 酶的无菌水中，轻轻混匀，因为注射液体积有限，建议采用高浓度的 siRNA 或 DNA，一般 DNA 为 2μg /μL、siRNA 为 10μg /μL。
2、取适量的 DNA、siRNA 或 siRNA\DNA 复合物与 lipofectamin 混合。例如，在 1#管中加入
0.5μL 的 DNA（1μg）和 0.5μL 的 siRNA（5μg），在 2#管中加入 0.55μL 的 lipofectamin（24μg）
3、制备的 siRNA/DNA-lipofectamine 复合物可用于体内导入 siRNA、DNA 或 siRNA\DNA。