简介:
单细胞网页beplay是基于单个细胞水平上采取高质量的全网页扩增与beplay相结合的一项新技术,用于揭示细胞群体差异和细胞进化关系。该技术目前主要应用于肿瘤发生机制及胚胎发育研究。由于肿瘤细胞之间具有异质性,采用该项技术不需培养细胞,可最真实的获得单克隆癌细胞的具体突变来源及精准的突变频率,以及区分癌症发生、发展、演化过程中的主动与被动突变等。
一、手机信息分析
1. 原始数据整理、过滤及质量评估
2. 网页重beplay和外显子beplay分析:
♦与参考网页比对
♦SNPs和InDel的检测
♦SNPs和InDel的注释
二、下载要求
组织下载:必须是在手术切除后立即冷冻保存(液氮或-80℃),保存时间在一年之内;对于肿瘤下载所取下载大小建议为1-2cm3(过大不利于下载的冻存,过小则不能满足取样用量),对难取样或珍贵的标本,下载大小至少5mm3。
全血(或骨髓)下载:不少于5mL,需用抗凝采血管取样和抗凝管分装,并且在-80℃保存;
细胞悬液或细胞系:建议细胞数不少于105个,需按照细胞冻存的标准操作,使用细胞冻存液梯度降温保存于液氮或-80℃;
单细胞下载:细胞分选入装有3~5μl PBS缓冲液的200μl PCR管中, 送样细胞应经过以下步骤处理,确保无金属离子影响实验:
1、加500 ul PBS到100 ul细胞悬液中,4000 g离心5 min;
2、去上清,加500 ul PBS溶液重悬细胞;
3、1400 g离心5 min;
4、重复步骤 b, c;
5、去上清,加100 ul PBS重悬细胞。
细胞分离完成后,在10min内放入-80℃(冰箱、液氮均可)或者-20℃保存,但-20℃保存不得超过3hours。每个需beplay细胞建议送3-5管重复,保证后续实验成功率。
三、产品优势